剛果紅染色

原理:
剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅——纖維素的復(fù)合物便沒法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌

方法:
常用的剛果紅染色法有兩種
方法一,先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)
在長出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mI。的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物質(zhì)的量濃度為l mol/l的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此時，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)透明圈。
（加NaCl的原因：剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)纖維素酶，能分解這個多糖底物成為寡糖，這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了，氯化鈉就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去，這樣就留下大小不一的透明圈，大的透明圈分解纖維素的能力就強(qiáng)）

方法二，在倒平板時就加入剛果紅
配制質(zhì)量濃度為10 mg/mI的CR溶液，滅菌后，按照每200 mI。培養(yǎng)基加入1 mI。的比例加入CR溶液，混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長出茵落后，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)明顯的透明圈 [1]

兩種剛果紅染色法的比較 : 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過20年的歷史，課本中給出了兩種方法。
方法一是傳統(tǒng)的方法，
優(yōu)點(diǎn)：這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。
缺點(diǎn)：操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；
方法二
優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，不存在菌落混雜問題，
缺點(diǎn)1：由于在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。
缺點(diǎn)2：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分

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